磁珠法质粒DNA小量提取试剂盒(预分装)
产品线 | 产品目录名称 | 规格 | 货号 | 目录价 |
核酸提取纯化 | 磁珠法质粒DNA小量提取试剂盒(预分装) | 64T | BK0022-01 | 160 |
产品介绍
磁珠法质粒DNA抽提试剂盒采用经典的SDS碱裂解法充分裂解释放质粒,再通过醇介导将质粒结合于纳米磁珠表面,经洗杂液洗去蛋白等杂质, 最后洗脱得到高纯的质粒产物。产物可用于酶切、转化、PCR、测序等分子生物学实验。
试剂名称 | 64 T |
溶液 P1 | 7 ml |
溶液 P2 | 7 ml |
溶液 P3 | 7 ml |
RNase (20 mg/ml) | 700 μl |
MagET™ 质粒DNA预分装试剂板 | 1*4 |
MagET™ 8孔磁棒套 | 4*2 |
注意事项
1 使用前检查各组分是否出现沉淀。若有,请轻轻摇晃混合均匀,或37℃水浴重新溶解。
2 使用前请将 RNase(20mg/ml) 全部加入溶液 P1中,用完置于4℃保存。
使用流程
样本预处理
1 取1-5ml 细菌培养物,加入离心管中,使用常规台式离心机12,000rpm(~13,400×g)离心1-5 min ,尽量吸尽上清。(菌液较多时可以通过 多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。
2 向留有菌体沉淀的离心管中加入100μl 溶液P1(请先检查是否加入RNase),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀将菌体充分悬浮。
注意:如果菌体未彻底混匀,质粒提取量和纯度会偏低。
3 向离心管中加入100 μl 溶液 P2,温和的上下翻转6-8次使菌体充分裂解,室温静置1~ 5 min(时间不宜过长),以免质粒DNA受到破坏 。
4 向离心管中加入100 μl 溶液 P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000rpm(~13,400×g)离心 5min,小心吸取全部上清,备用。
自动化法提取 -MagET™ Smart 16
1 取出MagET™ 质粒DNA预分装试剂板,颠倒混匀数次使磁珠重悬,轻甩MagET™ 质粒DNA预分装试剂板使试剂及磁珠均集中到试剂 板底部。
注:使用前小心撕去铝箔封口膜,避免MagET™ 质粒DNA预分装试剂板振动,防止液体溅出。
2 在MagET™ 质粒DNA预分装试剂板的第 2,8列中加入预处理的全部上清液,将MagET™ 质粒DNA预分装试剂板置于 MagET™ Smart 16的底座上。
注:请在加样后 1h 内上机运行程序。
3 将MagET™ 8孔磁棒套插入 MagET™ Smart 16磁棒套架卡槽内。
4 选择程序并运行,自动化程序结束后,取下MagET™ 8孔磁棒套丢弃,拿出MagET™ 质粒DNA预分装试剂板,使用移液器从MagET™ 质粒DNA预分装试剂板的第6,12列吸取出产物,即为质粒 DNA产物。如不能及时进行下游试验,质粒DNA 样本可短期保存于 -20℃。
表1.MagETTM Smart 16 程序设定
流程 | 工作孔位 | 名称 | 时长 | 幅度 | 频率 | 磁吸时间 | 转移等待 | 温度 | 加热时间 |
1 | 1 | 取磁珠 | 1min | 最大 | 最快 | 60s | 0 | - | 0 |
2 | 2 | 结合 | 5min | 较大 | 较快 | 90s | 0 | - | 0 |
3 | 3 | 洗杂 | 1min | 较大 | 较快 | 60s | 0 | - | 0 |
4 | 4 | 洗杂 | 1min | 较大 | 较快 | 60s | 120s | - | 0 |
5 | 6 | 洗脱 | 5min | 较大 | 较快 | 90s | 0 | - | 0 |
6 | 1 | 弃磁珠 | 1min | 最大 | 最快 | 0 | 0 | - | 0 |