磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒(单条孔)
产品线 | 产品目录名称 | 规格 | 货号 | 目录价 |
核酸提取纯化 | 磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒(单条孔) | 48 T | BK0018-01 | 380 |
产品介绍
磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒为经济植物样本的基因组DNA快速制备提供了一个简单快速的解决方案。该试剂盒采用独特的缓冲液系统 , 充分裂解植物细胞释放基因,再通过醇介导将基因结合于纳米磁珠表面,经洗杂液洗去蛋白等杂质,最后在低盐条件下洗脱得到高纯的基因组 DNA。提取过程无需使用有毒的酚氯仿抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀。提取的产物可用于PCR、载体构建、核酸杂交、高通量测序、转基因检测等下游实验。
试剂名称 | 48 T |
裂解液PA | 18 ml |
裂解液PB | 2.5 ml |
RNase (20 mg/ml) | 2 ml |
DTT | 800 μl |
沉淀缓冲液 | 6.5 ml |
MagET™ 植物DNA预分装试剂条 | 16*3 |
洗脱液 | 5 ml |
MagET™ 洗脱管 | 48 |
MagET™ 4孔磁棒套 | 2*6 |
注意事项
1 使用前检查各组分是否出现沉淀。若有,请轻轻摇晃混合均匀,或37℃水浴重新溶解。
2 RNase(20 mg/ml)请置于-20℃保存。
3使用前请将720μl DTT加入到裂解液PA中去,并置于4℃保存,保质期6个月。
4 沉淀缓冲液使用前请放置冰上预冷。
使用流程
样品预处理
1 对于纤维含量高的植物组织样本,将样本加入液氮研磨或使用组织研磨杵研磨成粉末;对于纤维含量低的植物组织,将组织剪碎成小块。
2 称取预处理好的植物组织样本 50-100 mg,迅速将样本加入预先装有350 μl裂解液PA (已加入DTT)的离心管中,用枪头吹打均匀后, 依次加入40 μl RNase(20mg/ml)、50 μl裂解液PB涡旋混匀,65℃孵育 10-30 min。种子样本建议起始用量 10 mg。
3 向上一步离心管中加入 130 μl沉淀缓冲液,震荡混匀,直至出现沉淀。 3.1.4 12,000 rpm(~13,400×g),离心 5 min,使用移液器小心将全部上清转移到新的离心管中。
自动化法提取-MagET™ Smart 8
1 取出MagET™ 植物DNA预分装试剂条,颠倒混匀数次使磁珠重悬,轻甩MagET™ 植物DNA预分装试剂条使试剂及磁珠集中到试剂条 底部。
注:使用前小心撕去铝箔封口膜,避免MagET™ 植物DNA预分装试剂条剧烈振动,防止液体溅出。
2 在MagET™ 植物DNA预分装试剂条的第 2 孔中加入预处理的全部上清液,将 MagET™ 植物DNA预分装试剂条置于 MagET™Smart 8 的试剂盒支架上。
注:请在加样后 1 h 内上机运行程序。
3 用移液器准确吸取 100 μl洗脱液,加入到 MagET™ 洗脱管中,将MagET™ 洗脱管安装于 MagET™ Smart 8的试剂盒支架上,将试剂盒支 架安装于 MagET™ Smart 8设备底座上。
4 将MagET™ 4孔磁棒套插入 MagET™ Smart 8磁棒套架卡槽内。
5 选择程序并运行,自动化程序结束后,取下MagET™4孔磁棒套丢弃。拿出试剂盒支架,取下 MagET™洗脱管,盖上管盖,即得植物基因组 DNA 产物。如不能及时进行下游试验,DNA 样本可短期保存于 -20℃。
表1. MagET™ Smart 8 程序设定
流程 | 工作孔位 | 名称 | 时长 | 幅度 | 频率 | 磁吸时间 | 转移等待 | 温度 | 加热时间 |
1 | 1 | 取磁珠 | 1min | 最大 | 最快 | 60s | 0 | - | 0 |
2 | 2 | 结合 | 5min | 较大 | 较快 | 90s | 0 | - | 0 |
3 | 3 | 洗杂 | 1min | 较大 | 较快 | 60s | 0 | - | 0 |
4 | 4 | 洗杂 | 1min | 较大 | 较快 | 60s | 0 | - | 0 |
5 | 5 | 洗杂 | 1min | 较大 | 较快 | 60s | 120s | - | 0 |
6 | 6 | 洗脱 | 5min | 较大 | 较快 | 90s | 0 | - | 0 |
7 | 1 | 弃磁珠 | 1min | 最大 | 最快 | 0 | 0 | - | 0 |