Improved General Phosphatase Inhibitor Cocktail (100xStock Solution) 

改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物（100x储液）

产品简介：

细胞内蛋白的磷酸化和去磷酸化是信号转导、细胞增殖、分化和凋亡等重要生理活动的调控开关，这两种作用主要通过蛋白激酶和磷酸酶的相互协调来实现。体外研究中，由于组织或者细胞经裂解会释放出大量的酶原，这些酶原会被激活从而开始消化随之释放的待研究蛋白，不仅影响对蛋白真实水平的了解，甚至由于某些蛋白含量很低，再经进一步降解，无法检测到，干扰对调控机制的正确研究。为此，体外研究，最大限度还原蛋白在细胞内的原始状态极其重要，可通过蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的组合使用来达此目的。

本品A，B两管的形式提供，A管是多种传统磷酸酶抑制剂的混合物，包含氟化钠，正钒酸钠，咪唑，钼酸钠，酒石酸钠等成分；B管是近年发现的一批天然代谢产物，具有更特别的磷酸酶抑制效果，也进一步增加了磷酸化保护范围。本品广谱抑制非特异性的酸性和碱性磷酸酶，以及特异性的酪氨酸磷酸酶，丝氨酸和苏氨酸蛋白磷酸酶等。

本品以100×储存液的形式提供，可用来保护来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种磷酸化蛋白维持本来状态，适用于蛋白纯化，蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫（共）沉淀（IP/Co-IP），蛋白下拉（Pull-down assay），免疫荧光（IF），免疫组化（IHC），以及激酶研究等多种实验。

保存条件: 

-20℃保存，1年稳定。

产品成分：

产品使用：

1） 使用前室温平衡直至完全溶解【注意：混合物 B 液为溶于 DMSO 的溶液，融化很慢，建议放到 25℃ 水浴锅内促进融化】 ，低速震荡以保证各成分均匀。

2） 按照 1:100 的比例（体积比）加入样品溶液（比如细胞或组织裂解液）中。分步加入 A、B 液：先加 A 液，混匀；再加 B 液，再一次混匀。

注意事项：

1.      DTT、EDTA和EGTA对正钒酸钠活性的发挥会有影响。

2.      本品与常用的去垢剂如1% SDS，Triton，和NP-40兼容。

3.      本品具广谱磷酸酶抑制活性，不具有蛋白酶抑制活性。可配合蛋白酶抑制剂Cocktail (无EDTA, 100×溶于DMSO)（货号：NBS0001-1ml）一起使用以实现蛋白的全面保护。

4.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题：

1.  混合物B液需要长时间融化？

因混合物B液是溶于DMSO。DMSO融化很慢，尤其是在低温环境下。建议25℃水浴促进融化。第一次使用将B液根据单次用量分装，比如10×100 µl，一方面能延长保存周期，一方面也能缩短融化时间。

2.  为什么磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白的Western条带都非常弱？

此种情况需加入蛋白酶抑制剂Cocktail (无EDTA, 100×溶于DMSO)（货号：NBS0001-1ml）以保护总蛋白不被降解。

3.  贵司提供两种磷酸酶抑制剂混合物，广谱磷酸酶抑制剂混合物（货号：NBS8061-1ml）和改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物（货号：NBS8062-2ml），两者有什么差别？

两者的差别主要在于所含的磷酸酶抑制剂组分不同，后者使用近些年发现的一批天然代谢产物，具有更特别的磷酸酶抑制广度。用户根据自身研究的磷酸化蛋白和细胞或组织特点来选择，大部分应用，两者可相互替换。

常见蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂：