植物过氧化氢染色液(DAB,pH5.5)

产品简介：

植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧（ROS），ROS活性非常大且极其不稳定，因此ROS 的检测通常因其最终产物而定。过氧化氢是活性氧的一种。在过氧化氢酶的催化下，过氧化氢能与DAB（3,3-二氨基联苯胺四盐酸盐）迅速反应生成棕红色化合物，从而定位组织中的过氧化氢。

植物过氧化氢染色液(DAB,pH5.5)根据上述基本原理也称为DAB染色法，用于植物活组织中的过氧化氢染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色，染色后有过氧化氢聚集的部位呈棕色至深棕色。

保存条件: 

4℃保存，一年有效。

产品组成：

产品使用：

1. 试剂准备：将100mg DAB加入到100mL磷酸缓冲液中充分溶解，即得DAB染色工作液，4℃避光保存，一周内有效；-20℃保存，可适当延长保质期。注：DAB对光敏感，溶解过程需要避光，如果较 难溶解，可通过超声、磁力搅拌等方法促溶。

2. 样本准备：采集经胁迫（例如重金属）的植物幼苗或根尖，自来水稍洗净，置于滤纸上吸干多余的水分。

3. 染色：将植物幼苗或根尖浸没在DAB染色工作染液中，常温避光染色2~6h，至阳性部位出现深棕色，其余部位近无色或者呈植物本身的颜色即可。（根据植物幼嫩程度和显色程度调整染色时间）

4. 脱色：用镊子将植株幼苗或者叶片小心取出，浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次，置于滤纸上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃处理3~16h，目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素，脱色期间可多次更换新鲜的95%乙醇。

5. 观察：用镊子取出植株幼苗或者叶片，浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次，置于滤纸上吸干多余水分 后，将样本转入适量DAB样本保存液中浸泡30min，随后可取出拍照。样本可置于该保存液中常温保存一周。

注意事项：

1.      DAB染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一周内使用。存放时间过久，会影响显色。

2.      因过氧化氢容易分解，且任何外在因素都可能刺激植物应激产生过氧化氢，因此植物样本需要新鲜采集，并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组。

3.      样本染色完成后尽快拍照保存结果。

4.      DAB可能具致癌性，请小心操作，避免直接接触。

5.      染色和脱色步骤也可参考如下建议操作：组织放入染液中，抽真空，-0.1MPa保持负压20~30min，再于室温下静置染色60min，弃染色液；加入95%乙醇，于70~80℃水浴锅脱色，每隔10min换一次 95%乙醇，待样品绿色全部褪去后可停止脱色。

6.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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