BCA蛋白定量试剂盒（增强型）

产品简介：

BCA 蛋白定量试剂盒（增强型）(Enhanced BCA Protein Assay Kit)根据常规BCA蛋白定量法研制升级而成，可 通过简单操作在实验室进行溶液的蛋白定量，测试灵敏度高、速度快、兼容性好。 与常规BCA蛋白定量试剂盒相比，本试剂盒灵敏度更高：检测浓度下限为10µg/ml，最小蛋白检测量为0.2µg。 与常规BCA蛋白定量试剂盒相比，本试剂盒显色速度更快：相同的样品孵育较短时间即可进行吸光度测定。 本试剂盒在待测样品蛋白浓度20-1500µg/ml范围内有较好的线性关系。 本试剂盒兼容性好，待测样品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20、60、80，10mM的MEDTA，1mM的D TT，0.01%的β-巯基乙醇对测试结果不产生影响。

保存条件: 

室温保存（1年有效）。

产品组成：

室温保存。蛋白标准配制成溶液后-20ºC冻存。

产品使用：

1. 蛋白标准品的准备

a. 用试剂盒内提供的注射器，将整支蛋白标准配制液加入到一支蛋白标准安瓿瓶(25mgBSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即使用，剩余的标准溶液请置-20ºC长期保存。

b. 取适量25mg/ml蛋白标准，用待测蛋白样品的溶解液稀释，至终浓度为0.5mg/ml。 注意：请确保用待测蛋白样品的溶解液来稀释标准品以达到最佳测试结果。若无法确定待测蛋白样品的溶解液，则可以用0.9% NaCl 或PBS稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准可以-20ºC长期保存。

2. BCA工作液的配制

根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如 5ml BCA试剂A+100µlBCA试剂B，混匀后配制成5.1mlBCA工作液。

注意：配制好的BCA工作液可在室温保存24小时。

3. 蛋白浓度检测

a. 将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20µl加到96孔板的标准品孔中，加不足20ul的标准品孔添加 标准品稀释液补足到20µl，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20µl，加标准品稀释液补足到20µl。请注意记 录样品体积。

c. 各孔加入200µlBCA工作液，37ºC放置20-30分钟。

注意: 也可以室温放置2小时，或60ºC放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色 反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

d. 用酶标仪或分光光度计测定各标准或样本A562，或540-595nm之间的波长的吸光度。

e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品的蛋白浓度。

注意事项：

1.      低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或 37℃温育或微波几十秒使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。

2.      样品中若含有浓度较高的EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会对检测结果产生影响，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用 TCA 沉淀去除干扰物质。

3.      为得到精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔且标准品与样品处理需尽量一致（如采用同样 的溶液溶解样品和标准品）, 每次均应做标准曲线。

4.      当试剂 A 和 B 混合时可能会有浑浊，但混匀后会消失。

5.      需准备 37℃水浴或孵育箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为 540-595nm，562nm 最佳。酶标仪需与96 孔酶标板配套使用。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

6.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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