Coelenterazine v 腔肠素v

【温馨提示】：见我司提供的活体成像底物-腔肠素及衍生物产品专题。

产品简介：

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程发射蓝色光，光波长在450~480nm。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg²⁺的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。

腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）。

天然腔肠素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在最丰富的一种腔肠素，也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白（APO）的底物，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度，后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测等。

腔肠素v（Coelenterazine v，CTZ-v）是天然腔肠素（CTZ-Native）的一种合成衍生物，多带一个苄基环。CTZ-v具有一独特的特性，能够将野生型海肾荧光素酶（wt RLuc），RLuc8和绿色海肾荧光素酶（Green RLuc）的发射光谱迁移到更长波长。

产品特性：

1）化学名：16-benzyl-5-hydroxy-13-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-11,14,17-triazatetracyclo [8.7.0.0^{2,7}.0^{11,15}]heptadeca-1(10),2(7),3,5,8,13,15-heptaen-12-one

2）同义名：CTZ-v; v-Coelenterazine; CLZN-v; v-腔肠素；

3）分子式：C28H21N3O3

4）分子量：447.48 g/mol

5）纯度：≥93%

6）外观：浅黄色粉末

7）化学结构图：

保存条件: 

-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

产品组成：

产品使用：

【注意】：最好在荧光计分析或实验前马上配制新鲜的腔肠素溶液。

1. 将低温保存的冻干粉置于-20℃回至室温，低温保存的溶剂用微量恒温仪（heat block）回至室温，之后进行短暂低速离心，使得管内组分都落到底部。

2. 往500μg腔肠素v内加入1ml 专用的腔肠素溶剂，可用微量恒温仪加热到70℃促进粉末完全溶解，混匀后即得到0.5mg/ml 储存液。【注意：不要用水浴锅加热，因溶液吸潮后会引起腔肠素v的快速降解】

3. 用PBS或TBS稀释储存液到所需的水溶性工作液（比如，若荧光计测定所需的浓度为50μM，加447.5μl（0.5mg/ml）到10ml PBS）。【注意：工作液现配现用，不可保存】

4. 腔肠素v储存液置于-80℃避光保存，避免反复冻融，有条件的话保存在氮气或氩气内。尽快用完。当储存液颜色变为深棕色/黑色，请勿继续使用，这表明药物完全降解（氧化）。

附录1 天然腔肠素及其衍生物的光谱特性：

附录2天然腔肠素及其衍生物的应用差异：

注意事项：

1.      腔肠素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失，这样不同实验之间的定量结果可能很不可信。

2.      商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录2—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录3—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。