Coelenterazine h 腔肠素h

【温馨提示】：见我司提供的活体成像底物-腔肠素及衍生物产品专题。

产品简介：

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg²⁺的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。

腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）。

腔肠素h（Coelenterazine h，CTZ-h）是天然腔肠素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上（最大发射波长~466nm，半衰期为0.6-1.2sec）。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比天然发光复合物对钙离子灵敏度更高，是一种检测钙离子浓度微小变化的实用探针。另外，CTZ-h是海肾荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）的底物，适用于体内外报告基因分析。 

产品特性：

1） CAS NO：50909-86-9

2） 化学名：2,8-dibenzyl-6-(4-hydroxyphenyl)imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one; Imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one, 6-(4-hydroxyphenol)-2,8-bis(phenylmethyl);

3） 同义名：h-Coelenterazine; h-CTZ; 2-Deoxycoelenterazine 2-脱氧腔肠素; 2-(4-Dehydroxy) coelenterazine；Luciferin (Renilla) 海肾荧光素；

4） 分子式：C26H21N3O2

5） 分子量：407.5 g/mol

6） 纯度：>98%

7） 外观：黄色固体

8） 溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）化学结构图：

保存条件: 

-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

产品使用：

一、 腔肠素工作液制备

【有关腔肠素溶解的注意事项】：

1） 腔肠素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低，一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液，然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作浓度，现配现用。

2） 腔肠素在溶液中的稳定性比较低，最好于正式实验前才配制溶液（包括高浓度母液）。但若实际要求，必须保存母液，目前来说最稳定的溶剂是丙二醇，往内加入少量L-抗坏血酸，β-巯基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能维持其还原态。不过，还原剂可能会减低氧化腔肠素（氧化为Coelenteramide）的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀，实际取决于溶液浓度。当然，可通过加热50-60℃，使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀，或在实验前（特别是活体动物实验）离心去沉淀。

1.1 腔肠素母液制备

将低温保存的腔肠素粉末置于室温回温至少20min，低速离心后。往500µg腔肠素h内加入102µl 酸化的醇溶液（100%甲醇或100%乙醇中含有20µl/ml 3N或6N HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔肠素母液。也可根据下游应用配制成适宜浓度的腔肠素母液（1~5mg/ml）。≤-20℃（最好-80℃）分装避光保存，可能会有少量活性的丧失，约保存1~3周。若存放在惰性气体内可相对延长保存周期。

1.2 腔肠素工作液制备

直接用去气蒸馏水（degased distilled water），PBS或者其他类型生理缓冲液（pH 6.6-7.2）稀释，选择的稀释缓冲液需考虑到与酶系统配合。工作液需现配现用。比如，可直接用不含Ca²⁺/Mg²⁺的PBS将12 mM的储存液稀释到2mM（~1 mg/ml）的工作液，+4°C避光短暂存放。最佳反应液浓度请根据下游应用来调整。

附录1 天然腔肠素及其衍生物的光谱特性：

附录2天然腔肠素及其衍生物的应用差异：

注意事项：

1.      腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。由此，导致不同组间的定量结果可能显得不可靠，数据可比性不高。

2.      腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素h溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。若是必须配成液体储存液，请按照操作步骤一、腔肠素工作液制备执行。

3.      体内动物实验，推荐使用我司特别开发和优化的注射用腔肠素h（Injectable h-Coelenterazine）（货号：NBS5921）或注射用天然腔肠素（Injectable native Coelenterazine）（货号：NBS5919）。

4.      发光蛋白与荧光素酶是完全不同的，比如腔肠素h（CTZ-h）适合用作海肾荧光素酶（Rluc）的底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）的底物。天然腔肠素（CTZ-native）是唯一适合分泌型膜锚定荧光素酶的一种报告基因底物。

5.      商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

6.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。