钾离子指示探针

Enhanced Potassium Green-2 AM

(Replacement of Asante Potassium Green-2 AM)

【温馨提示】：见我司整理的钾离子载体探针（Potassium ionophoresindicators）产品专题。

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（NBS2009-1g）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。

产品简介：

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM）是Asante Potassium Green-2 AM（APG-2 AM）的替代物，

是一种具细胞膜渗透性的新型K+荧光探针，具有容易加载、缓慢泄露、良好光稳定性和宽动力学范围等理想特征，正好弥补传统K+荧光探针PBFI AM（货号：NBS7670）的缺陷。EPG-2 AM被可见光激发，最佳激发波长为517nm，但也能被传统波长488nm激发检测。虽然不是比率型探针，但其宽广的动力学范围使其甚至能检测到变化很小的K+浓度。EPG-2 AM用近红外波长的双光子激发下信号很强且抗荧光淬灭很好。也适用于共聚焦显微镜、流式细胞仪和高通量筛选分析。

产品特性：

1） 分子式：C55H64Cl2N2O19

2） 分子量：1128.02 g/mol

3） 纯度：＞ 80%（HPLC）

4） 最大激发波长：526 ± 3 nm（in methanol）

5） 最大发射波长：546 ± 3 nm（in methanol）

6） 解离常数（Kd）：18mM

7） 动力学范围（Fmax/Fmin）：12

8） 溶解性：溶于DMSO

9）化学结构图：

保存条件: 

-20ºC避光干燥保存，1年有效。

产品使用：（以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。）

1.1 使用无水DMSO溶解EPG-2 AM（Mw：1128.02 g/mol）配制成1-5mM储存液，比如往50μg EPG-2 AM冻干粉内加入22μl DMSO，充分溶解后配制成2mM储存液。-20ºC分装干燥冻存，避免反复冻融。

1.2 通常在含适当浓度AM探针的无血清培养基中实现探针加载。建议正式实验前向加载培养基内加入Pluronic F-127以促进AM探针的分散。可用DMSO配置20% Pluronic F-127储存液或其他浓度，只需在正式实验前将其与EPG-2 AM储存液混合，然后加入加载培养基，保证其终浓度＜0.1%（w/v）。

1.3 室温或37℃孵育细胞（可能在室温的探针加载质量会高些），孵育浓度通常为1-10µM，孵育时间通常为30-60min，具体的请根据实际情况或参考文献资料。

1.4 【可选】对于大分子量AM探针（分子量≥1000g/mol），孵育结束，加入不含AM探针的细胞加载培养基额外孵育20-60min，以确保细胞将AM基团完全去酯化。

1.5 用不含血清和探针的培养基清洗细胞至少一次，以降低细胞外背景荧光。

1.6 最后用合适的仪器来检测荧光信号。检测用最大激发波长517nm，最大发射波长540nm。

【注意】：

a) 如果细胞加载培养基是以碳酸氢钠为缓冲体系，那么加载需要含5% CO₂的环境内进行，以防止因CO₂损失引起的培养基碱化。

b) 如果细胞加载培养基含血清，那需适当提高AM探针工作浓度，以补偿因AM探针与血清蛋白结合引起的损失。

c) 某些情况下，对分子量接近或超过1000的AM探针，需用不含AM探针的细胞加载缓冲液进一步孵育20-60min，以保证细胞内酯酶能充分降解AM基团。

d) 探针的加载时间和浓度因具体的细胞类型而有差异，请根据具体的细胞类型来优化。

e) 对每一种探针有必要通过校准（calibration）来得到实际解离常数（Kd）。物理条件如温度，pH，离子强度或溶液粘度，以及探针与细胞组成成分如蛋白质的相互作用，都会影响Kd值。实际情况细胞内的Kd比体外溶液通常要高。因此，细胞水平研究有必要进行校准确认实际Kd值。

f) 对于EPG-2，虽然最大激发波长在517m，但其极强的荧光亮度使其能够用标准的488nm滤片来激发，与Fluo系列的可见光钙离子指示探针检测手段一致。值得注意的是，488nm激发下得到的荧光强度约为最大激发波长下的40%。

注意事项：

1.      EPG-2 AM易受潮，粉末需干燥保存；粉末需用无水DMSO溶解，配制储存液（如10mM），置于-20℃干燥避光保存，小量分装避免反复冻融，至少3个月稳定。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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