化学发光试剂盒

ECL Basic/Enhanced/Super

产品介绍 

本产品是基于鲁米诺底物的化学发光试剂盒，能够被辣根过氧化物酶（HRP）催化发光。本试剂盒优化了底物组成，使用了新型高效增强剂，发光 强度比传统ECL显色液提高了30-100倍，并有效地降低了背景。试剂盒使用新的氧化剂代替不稳定的双氧水，提高了试剂盒的稳定性，室温可稳定放置1年。发光检测工作液被HRP催化后，发出特定波长荧光（400-450 nm），可对X光胶片曝光，也可直接使用荧光CCD扫描，主要应用于 Western检测以及化学发光免疫检测系统。

缓冲液配制 

一抗工作浓度： 0.2-1.0 µg/mL； 

HRP标记二抗工作浓度： 10-500 ng/mL，根据二抗效价调整； 

发光检测工作液的使用比例： Solution I : Solution II = 1:1；10 cm2 转印膜使用1-2 mL工作液。 

抗体去除液 

ECL Basic： 0.1 M 甘氨酸，HCl调整pH至2.7； 

ECL Enhanced： 2% SDS, 0.1 M β-mercaptoethanol, 50 mM Tris-HCl, pH 7.0； 

ECL Super： 6 M GuHCl, 0.2% Nonidet P-40 (NP-40), 0.1 M β-mercaptoethanol, 20 mM Tris-HCl, pH7.5。

操作步骤 

根据常规操作转印结束后，进行封闭、一抗孵育、二抗孵育以及必要的洗膜步骤，根据膜的大小，按每10 cm2 膜使用1-2 mL工作液，按比例吸取 等体积Solution I和Solution II混匀，配制成发光检测工作液。用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体。用移液器 将工作液加到转印膜上，使其均匀覆盖，室温孵育1-2 min，此步骤可在洁净保鲜膜上或塑料盒中完成。 

1 X光胶片法 

1) 用平头镊子夹起转印膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不要让膜完全干燥。膜的蛋白面朝上，包裹于洁 净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡，用小块透明胶带粘住四角，固定在X光片暗盒内。 

2) 在暗室中取一张X光胶片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30 s至1 min。立即定影、显影，根据曝光强度，调整下一张X光胶片的曝光时间。如 果背景过高，可以使用两张X光胶片同时压片。 

2 荧光拍照法 

1) 如果需要使用CCD拍照，可以将膜放置于工作液中，开机后按照使用说明，将转印膜取出，进行拍照。 

2) 可以根据背景情况，调整机器测量参数，提高信噪比。

3 管式化学发光法 

1) 将鲁米诺的化学发光检测波长可设定在425 nm左右，可以选择单点测量，或者取多次平均值。 

2) 按照机器要求，将配制好的工作液加入到样品管中，间隔一定时间测量发光强度，注意鲁米诺系统的发光到达峰值有一定延迟（30-300 s），不同样本的测量时间间隔要固定。 

3) HRP催化鲁米诺发光的体系还受到反应温度以及pH的强烈影响，所以工作试剂准备以及发光测量需要考虑到此类因素。

注意事项 

1）试剂盒Solution I为底物，保存于避光试剂瓶中，Solution II为氧化剂。通常取样顺序是先取底物Solution I, 换枪头后再取氧化剂Solution II。 

2）本试剂盒较为稳定，室温（25℃）可以保存一年以上，长期不用建议保存在2-8℃。 

3）使用生物素-亲和素系统时，避免使用牛奶封闭，可能会造成背景过高。 

4）金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，可以使用平头塑料镊子。 

5）叠氮化钠抑制HRP的催化能力，在缓冲液中尽量避免使用叠氮化钠作为防腐剂。 

6）封闭、洗膜、孵育等步骤耗时较长，注意膜与塑料界面的摩擦不均匀可能造成部分位置条带消失，可以在保鲜膜中孵育以及封闭，洗膜的塑料 盒底面不要有明显凸起，可以通过剪角的方法，区别转印膜有蛋白的一面。 

7）不同转印膜对蛋白的吸附能力不同，硝酸纤维素较软，避免出现折痕。PVDF膜使用前需要使用甲醇水化均匀。 

8）勿将多张膜置于同一个洗膜盒中洗膜，相互吸附以及摩擦可能造成很深的背景。 

9）转印、封闭、孵育都要避免气泡。