鬼笔环肽及偶联物（Phalloidin and Phalloidin Conjugates）

产品专题
 ◎ FORSTAINING ACTIN肌动蛋白染色探针 ◎    

背景介绍：

肌动蛋白（Actin）是一种分子量~42kDa的细胞骨架蛋白，几乎存在所有真核细胞中。也是一种最高度保守蛋白，藻类和植物之间序列差异不超过20%。肌动蛋白是细胞中两种纤维的单体亚基：微丝（Microfilaments），又称肌动蛋白丝（Actin filaments），细胞骨架三种主要成分之一；细肌丝（Thin filaments），肌肉细胞收缩丝的一部分。因此，肌动蛋白参与许多重要的细胞生理过程，包括肌肉收缩、细胞运动、细胞分化和胞质分裂、囊泡和细胞器运动、细胞信号，以及细胞连接和细胞形状的搭建和维持。

单体形式存在的称为球形肌动蛋白（Globular actin，G-actin），具有紧密的结合位点介导其与另外两个单体肌动蛋白进行头-尾相互作用，从而使得单体激动蛋白聚合形成纤维（Filamentous actin，F-actin）【见图1.肌动蛋白丝的组装和结构】。

图1. 肌动蛋白丝的组装和结构。（A）G-actin聚合形成F-actin。第一步生成二聚体和三聚体，然后通过逐步添加单体蛋白到两端来生长。（B）G-actin的结构。

鬼笔环肽（Phalloidin），又称鬼笔鹅膏素，是从毒蘑菇鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）中分离到的一种七肽毒素，以极高的亲和力和特异性结合肌动蛋白丝F-actin（聚合形式的肌动蛋白），不会结合单体肌动蛋白（G-actin）。不像一些肌动蛋白抗体，同时识别单体和聚合形式的肌动蛋白。鬼笔环肽使得肌动蛋白聚合/解离的临界浓度降低至1μg/ml，可用作一种聚合增强剂。产生的复合物高度稳定（解离常数约为3×10–8M），从而抵抗去聚合和去组装活性。

本公司（上海诺宁生物）提供一系列常用的科研用途鬼笔环肽及其荧光偶联物，颜色涵盖全部的可见光光谱区间。如此丰富的鬼笔环肽偶联物满足用户多重需求，且基本现货供应，欢迎来电咨询。

产品应用：

1） 用来标记、鉴定和定量肌动蛋白丝（F-actin）；

2） 体外稳定肌动蛋白丝（F-actin）；

3） 体外观察固定或活细胞中肌动蛋白丝（F-actin）的定位、分布，以及观测单一的F-actin；

4） 高分辨率下研究肌动蛋白网络；

产品特点：

1） 应用范围广：甲醛固定和透化处理的组织切片、培养细胞，以及无细胞实验体系；无物种差异性；

2） 亲和力高、稳定性强：解离常数Kd约3×10–8M；

3） 特异性强：特异结合F-actin，不会结合G-actin，背景明显低于Actin抗体染色，几乎无特异性染色，且不受物种限制。

4） 毒性小：鬼笔环肽及衍生物分子量小，对F-actin影响小。经标记后的F-actin仍维持许多未标记actin的功能特征包括与肌球蛋白的相互作用。

5） 灵敏度高：nM浓度即可达到染色需求；

6） 适合多重标记实验：提供多种鬼笔环肽荧光偶联物，选择范围广，能实现多重标记；

染色流程【图2】：

染色示例：

 图3. Jasplakinolide (Jas)或Cytochalasin D (Cyto D)对HSC-T6细胞肌动蛋白骨架重组的生理效应。HSC-T6细胞分别经DMSO (vehicle control)，Jas (100 nM) or Cyto D (1 μM)处理1h，之后4%多聚甲醛固定15 min。之后phalloidin-FITC（CAT# NBS5830）染色肌动蛋白丝，细胞核用DAPI（CAT# NBS1205）复染。荧光显微镜下成像检测。

图4. HeLa细胞经iFluor™ 488 Phalloidin染色后荧光显微镜检测图（FITC滤片设置-绿色）。

 图5. HeLa细胞经iFluor™ 647 Phalloidin染色后荧光显微镜检测图（Cy5滤片设置-红色）。

产品订购：

高品质鬼笔环肽及偶联物系列产品，让你的实验数据“美”起来！！

【注】：iFluor™系列的荧光光谱同Alexa Fluor™系列，荧光稳定性和荧光强度几乎与Alexa Fluor™一致，是传统荧光探针FITC, TRITC, 5-TAMRA等的升级品。

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