5(6) -羧基荧光素琥珀酰亚胺酯

5/6-FAM SE (NHS-Fluorescein, FITC-NHS)

产品简介：

NHS-Fluorescein（NHS-荧光素，FITC-NHS），别名：5/6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（5/6-carboxyfluorescein succinimidyl ester,5/6-FAM SE），是一种荧光素染料的胺反应性衍生物，具有广泛的分析应用，可作为抗体和其他探针的标记，用于荧光显微镜检测、流式细胞分析和免疫荧光测定（如Western印迹和ELISA）。

NHS-Fluorescein（NHS-荧光素，FITC-NHS，5/6-FAM SE）通过琥珀酰亚胺酯（NHS酯）官能团活化。与FITC（异硫氰酸荧光素）相比，在生物偶联上表现出更多优势。首先，FAM形成的酰胺能更好耐受水解，其次，FAM对偶联条件的要求更不严格且有更好的偶联效率，生成的偶联物稳定性更突出。FITC标记的核酸和多肽与对应的FAM标记产物比较，具有更快变质的倾向。据发现，在绝大数的生物应用中都能用FAM试剂来替代FITC试剂。

产品特性：

1）  CAS NO.：117548-22-8

2）  同义名：5(6)-FAM, SE;5(6)-FAM,NHS ester;5(6)-Carboxyfluorescein NHS ester (mixture of isomers), 5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester;5-(and-6)-Carboxyfluorescein, succinimidyl ester;FLUOS; 5 (6)-羧基荧光素N -羟基琥珀酰亚胺酯；NHS-荧光素（5/6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯）,混合异构体；5/6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯；

3）  分子式：C₂₅H₁₅NO₉

4）  分子量：473.39

5）  荧光：λex 492 nm; λem 517 nm in DMF

6）  外观：粉末

7）  溶解性：溶于DMSO、DMF

8）  纯度：≥95%

保存条件: 

-20℃避光干燥保存，2年有效。 

注意事项：

1.      5/6-FAM SE是5-FAM和6-FAM的异构体混合物，这些异构体的特性在激发和发射光谱方面无法区分。对于蛋白应用，不需要分离特定异构体。

2.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

SE化合物生物标记的几个考虑因素：

1） 溶剂

大多数情况下，SE化合物（反应性染料）都是疏水性分子，需用无水DMF或DMSO作为溶剂。比如：5/6-FAM SE（Mw：473.39）需先溶于高质量无水DMSO配制成≥1mg/ml的母液，之后加入反应缓冲液中进行标记实验。强烈推荐新鲜配制母液和工作液，如果非要保存母液的话，请务必根据单次用量分装，≤-20℃避光密封干燥保存，尽量在1个月内用完。

2） 反应pH

SE与胺的标记反应具非常强的pH依赖性。胺反应化合物与非质子化的脂肪胺反应，包括：蛋白的末端胺，赖氨酸的ε-氨基。氨酰化通常在pH 7.5以上进行。通过SE基团的蛋白修饰通常在pH 7.5-8.5之间进行，而异硫氰酸基团需在pH 9.0-10.0之间才能获得最佳的标记效果。

3） 反应缓冲液

缓冲液含游离胺（比如：Tris、甘氨酸和巯基化合物）必须避免，因为这些也是胺反应试剂。铵盐（硫酸铵或醋酸铵）普遍用于蛋白沉淀中，必须在进行染料标记之前去除。

比如：5/6-FAM SE进行蛋白标记，可选择50mM硼酸钠缓冲液（pH 8.5）作为反应缓冲液。

4） 反应温度

大部分标记反应在室温进行，然而，对于某些特殊的标记反应可能需提高或降低温度。