外泌体荧光染料（DiR）

Exosome Fluorescent labeling dye（DiR）

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产品简介：

DiR（Cy7 DiC18，亦记作 DiOC18 (7)）属于亲脂性近红外荧光碳菁染料。该染料带有两条 C18 烷基长链，能够嵌入脂质双分子层，与细胞膜及各类亲脂性生物分子结合，实现特异性、稳定性的细胞染色，染料跨细胞转移现象极低；染料在水溶液中荧光微弱，进入疏水环境后荧光强度显著提升，同时具备较高的摩尔消光系数，激发态寿命约 1 ns。

DiR 发射的近红外光具备优异的组织穿透能力，适用于深层组织活体成像、细胞示踪，也可用于细胞器、脂质体、病毒、脂蛋白以及纳米载体的标记示踪。其光谱参数为激发波长约 748 nm，发射波长约 780 nm。作为 DiI 系列的同类染料，部分磺化修饰的 DiR 衍生物可提升水溶性。染料加入细胞后，能够沿细胞膜发生侧向扩散。

DiR 可与 DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）等细胞膜荧光染料联用，可满足多色成像与流式细胞分析的实验需求。

本产品为预配制 DiR 母液，浓度 1 mM，专用于外泌体荧光染色。

化学信息：

1)     CAS NO.：100068-60-8

2)     化学名：1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindotricarbocyanine Iodide

3)     英文同义名：Cy7 DiC18; DiR iodide

4)     分子式：C₆₃H₁₀₁IN₂

5)     分子量：1013.39

6)     荧光波长：λ_ex 748 nm；λ_em 780 nm

保存条件: 

-20℃避光（一年有效）

产品使用：

一、        染料工作液制备：

将外泌体荧光标记染料（DiR）用 1×PBS 稀释 10 倍，配制成终浓度 100 μM 的染料工作液。

二、        外泌体染色

1.     向外泌体悬液中加入染料工作液，染料终浓度控制为 10‑20 μM（可加入终体积 1/5‑1/10 的 100 μM 染料工作液）。

2.     加入染料工作液后拧紧离心管管盖，涡旋振荡 1 min 充分混匀，置于 37 ℃条件下孵育 30 min。

3.     向孵育完成的外泌体‑染料复合物体系中加入 10 mL 1×PBS，充分混匀。

注：加入 10 mL 1×PBS 稀释可根据所使用的纯化体系灵活调整，试剂盒体系注意不要超过最大上样体积。

4.     参照外泌体提取流程重新纯化外泌体，去除未结合的游离染料。

注：本步骤必不可少，可避免游离染料干扰后续实验结果。

5.     取 200 μL 1×PBS 重悬沉淀，所得即为染色完成的外泌体。

注意事项：

1.     荧光染料存在光淬灭现象，染色孵育、样品保存及成像全程均需避光操作，减缓荧光淬灭。

2.     染料工作液必须现配现用，不可提前配制储存，否则会降低染色效果。

3.     若后续需要对 DiR 标记后的外泌体处理的细胞或组织样本进行固定，推荐使用 4% 多聚甲醛；使用其他不合适的固定剂会造成较高荧光背景。不建议对已固定完成的细胞、组织直接进行 DiR 染色。

4.     活体成像对外泌体浓度要求较高，待标记的外泌体原液推荐浓度为 0.5‑1.5 μg/μL；外泌体浓度过低会显著提升实验失败风险。受样本制备条件限制无法达到该浓度时可酌情降低，但会降低成像信噪比。

5.     DiR 碘化物（DiR 染料）发射波长处于近红外区，肉眼无法观测，需使用配备 CCD 镜头或近红外模块的检测设备，优先选用活体成像仪；普通荧光显微镜大多不支持该通道检测。

6.     标记外泌体经动物注射后，建议 24 h 内设置多个时间梯度观测；多数条件下荧光信号在注射后 2‑8 h 达到峰值。小动物成像前需进行剃毛处理，保障成像质量。实验需设置游离染料对照组，排除游离染料代谢带来的非特异性荧光干扰。

7.     染料标记时，建议制备2 倍于活体成像 / 示踪实验实际用量的外泌体，原因如下：①外泌体染色效率无法达到 100%；②去除游离染料的纯化过程会不可避免造成外泌体损耗。

8.     DiR 为非共价膜插入型染料，标记完成后染料会逐步从外泌体膜脱落，标记后的外泌体建议尽快用于动物实验，不宜长期保存。

9.     为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

使用本产品发表的文献：

1.     Hou L, Cao J, Gao S, Wang X, Zhang Z, Li M, et al. Thermally Induced Reassembly of Ginger Extracellular Vesicles for Oral Therapy of Intestinal Inflammation. Research [Internet]. 2026 Aug 3;9:1377. doi:10.34133/research.1377. （IF=12.9）

Available from: https://doi.org/10.34133/research.1377

The exosome protein specific lysis buffer and 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindotricarbocyanine iodide (DIR) were purchased from Shanghai Nonin Biological Technology Co. Ltd.

2.     Xinrui Z, Qian C, Li Y, Jin Z, Yinghua M, Rong Y, Hao S, Wenjing W, Xuewei S, Zhuohan Z, Chunyan G, Mingyan Z, Ruonan Z, Han L, Zhipeng C, Hong L, Zhan Y. Ginger‑derived vesicle‑like nanoparticles loaded with curcumin to alleviate ionizing radiation‑induced intestinal damage via gut microbiota regulation. Gut Microbes [Internet]. 2025;17 (1):2531210. doi:10.1080/19490976.2025.2531210. （IF=11.0）

Available from: https://doi.org/10.1080/19490976.2025.2531210

PKH67, and DiR were Nonin Biotech.

3.     Liu J, Wang M, Tian X, Wu S, Peng H, Zhu Y, et al. New insights into allergic rhinitis treatment: MSC nanovesicles targeting dendritic cells. J Nanobiotechnol [Internet]. 2024 Sep 19;22:575. doi:10.1186/s12951-024-02748-2. （IF=15.0）

Available from: https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-024-02748-2

The DiR labeling was carried out using the DiR fluorescent dye (Noninbio, NW3201) according to the manufacturer's instructions prior to administration.

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