组织消化液（IVD）

Tissue Digestive Mix-I 

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【预期用途】

用于从组织上消化原代干细胞，做后续细胞体外增值培养。培养后的细胞仅用于体外分析检测，不作为治疗使用。

【检验原理】

以特定酶自组织块分离出原代间充质干细胞是常见的细胞培养技术。组织消化液利用数种重组表达的消化酶制备而成，无动物源成分。组织消化液针对组织的细胞外基质而设计, 不含胰酶，不会伤害细胞。可以有效地消化细胞外基质，进而从组织块 (脐带、脂肪、胎盘) 分离出大量的原代间充质干细胞，作为后续细胞增殖使用。

【主要组成成分】

 由 DMEM -LG 基础培养基、膠原脢、分散脢、脱氧核糖核酸酶组成。

【适用范围】

收获组织 (脐带、脂肪、胎盘)的原代间充质干细胞, 做后续细胞体外增殖培养。

【储存条件及有效期】

应贮存在-10~-20℃，有效期为1年。开封后存放4℃，注意避光，1周内使用。不建议反复冻融。干冰运输。

【生产日期与失效日期】

详见产品标签。

【使用方法】

以脐带组织为例

  1. 将脐带用DPBS漂洗干净，剪成1-50px大小，剔除血管。

  2. 将组织块剪成3-5mm₃，移入50ml离心管，再加入适量的分离液。

  * 一条长度10公分的脐带建议加入10ml的分

离液；或者组织块 : 分离液（vol）= 1:1。

** 视情况而定，可自行在分离液中添加1%青链双抗。

3. 把50ml离心管横放在37度细胞培养箱，过夜反应（16小时）。

* 若总反应体积较大，也可持续旋转混合。

4. 加入和分离液等体积的0.05%EDTA终止反应后，1500 xg离心5分钟，去除上清。

* 溶液比较浓稠，小心不要影响下层的细胞; 建议留下5ml左右的溶液。

** 没有EDTA, 可使用无钙镁DPBS取代。

5. 以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，500 xg离心5分钟，去除上清。

6. 再次以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。

7. 用适量的培养基重悬细胞后，即可按常规细胞培养方法接种P0代细胞培养。

* 消化后的原代细胞，建议培养时接种密度提高到10,000/cm2以上；传代后即可按常规的接种密度培养 。

以皮下脂肪组织块为例

 1. 以DPBS将新鲜的皮下脂肪组织块漂洗干净，剔除明显的血管或血块。

 2. 将组织块剪成3-5mm₃，移入50ml离心管，再加入适量的分离液。

 * 1克组织块可加入约5ml分离液。

 ** 视情况而定，可自行在分离液中添加1%青链双抗。

 3. 把50ml离心管横放在37度细胞培养箱，反应4小时 (用户也可自行调整反应时间)。

 * 若总反应体积较大，也可使用持续旋转混合。

 4. 加入和分离液等体积的0.05%EDTA

终止反应后，250 xg离心5分钟，去除上清。

 * 没有EDTA, 也可使用无钙镁DPBS取代。

 5. 以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。

 6. 再次以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。

 7. 用适量的培养基重悬细胞，再以100目的筛网过滤细胞液后，即可按常规细胞培养方法接种细胞培养。

 * 消化后的原代细胞，建议培养时接种密度提高到10,000/cm2以上；传代后即可按常规的接种密度培养。

【产品性能指标】

1. pH值：7.0-8.0

2. 渗透压（MOSM/KG）：310-345

3. 无菌检测：无菌

4. 内毒素（EU/ml）：＜10

5. 原代细胞分离实验：＞80%

【注意事项】

1. 本品仅用于体外诊断，不用于临床治疗，严禁内服，不能用嘴吸液。

2. 试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。

3. 操作过程应避免污染。

4. 操作人员万一与皮肤、粘膜接触，请立即用自来水冲洗。

5. 禁止使用超出规定有效期的产品。

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