Picogreen双链DNA定量试剂盒

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent KIT

产品简介：

Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建，DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义，疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

Picogreen dsDNA定量检测：Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。

相比传统的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：①灵敏度高：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品；②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

本试剂盒含有实验所需的所有试剂，使用更快捷方便。若按照2ml反应体系来计算（比色皿），10×100 µl kit可做100次反应；若按照200µl反应体系来计算（96孔板），10×100 µl kit可做1000次反应；单次反应体系取决于荧光检测仪器。

产品组成：

保存条件: 

2-8℃避光保存，1年有效。长期不用可置于-20℃保存。

产品使用：

一、PicoGreen (2×)工作液配制

使用前将PicoGreen dsDNA 定量试剂回温至室温；PicoGreen是以100µl 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中。实验当天，根据实验需求用1×TE按1:100 的比例稀释适量母液到PicoGreen (2×)。

例如：要准备足够的操作溶液以2ml检测体系测定20个样品，可向19.8ml 1×TE 中加入200µl PicoGreen dsDNA 定量试剂 (200×)。

【注意】：a）由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。b）PicoGreen见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。c）溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。d）Picogreen的最终工作浓度建议为1×；用户也可根据实际情况调整此浓度，比如：最终工作浓度调低到0.5×。

二、 检测步骤

2.1 Lambda DNA standard (200ng/ml)的配制

用1×TE对λ DNA standard (10µg/ml)进行50倍稀释。比如，向10µl λ DNA standard (10µg/ml)加入490µl 1×TE混匀，此时标准品浓度为200ng/ml；

2.2 标准曲线的制备

【注意】：根据2010年《中国药典》所提，PicoGreen定量DNA的方法检出限~0.3ng/ml。DNA含量在1.25-80ng/ml范围内线性较好（R2＞0.99），因此，在此范围内设置浓度梯度，建议标准曲线较好。

l  比色皿体系检测（2ml）

a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和λ DNA standard（200ng/ml），通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液，随后加入1ml PicoGreen (2×)定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1×TE缓冲液为blank。【注意】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。

表1 比色皿体系所需加入各组分量及标准品终浓度表

b、于荧光仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=~480nm/520nm。

【注意】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接近荧光仪的最大值；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度标准溶液得到的荧光值减去空白对照荧光值，之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线，来确定样本DNA的浓度。

l  微孔板体系检测（200µl）

a、按照表2 向96孔板中加入TE和λ DNA standard（200ng/ml），通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液，随后加入100µl PicoGreen (2×)定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1×TE缓冲液为blank。【注意】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微孔板的外部，可以驱散气泡。

表2 酶标板体系所需加入各组分量及标准品终浓度表

b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=~480nm/520nm。

【注意】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接

近荧光仪的最大值；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值，之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线，来确定样本DNA的浓度。

注意事项：

1.      Picogreen定量试剂含有DMSO（已知有毒试剂），请小心操作。

2.      尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链DNA，请操作时务必小心。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！