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RNase III 核糖核酸酶III 

产品简介：

RNase III，即核糖核酸酶III，是一种来源于大肠杆菌的双链RNA (Double-strand RNA, dsRNA)特异性的核糖核酸酶。在锰离子(Mn²⁺)存在的反应缓冲液中，RNase III可特异性地将较长的双链RNA (dsRNA)切割成长度约为18-25bp的3'羟基末端带有2-3个突出碱基的干扰RNA (siRNA)，该产物与Dicer酶切产生的底物类似，具有用于哺乳动物细胞的RNA干扰(RNA interference)、基因沉默、靶标确认等多种用途。RNase III不能水解DNA或单链RNA。

用途：dsRNA的水解酶切；产生siRNA；基因沉默；基因靶标确认 (target validation)。

来源：纯化自携带编码大肠杆菌RNase III基因的E.coli重组菌株。

活性定义: One unit is the amount of enzyme required to digest 1µg of dsRNA to siRNA in 20 minutes at 37ºC in a total reaction volume of 50µl.

纯度：不含除RNase III之外的其它种类的RNA内切酶和外切酶，不含DNase。

酶储存液：10mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 1mM DTT, 0.5mM EDTA, 50% Glycerol (pH8.0 @25ºC)。

10X Reaction Buffer: 500mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 10mM DTT (pH7.5 @25ºC).

失活或抑制：不能进行热失活；加入反应终止液10X EDTA(终浓度为50mM EDTA)可使RNase III失活。

保存条件: 

-20ºC保存，2年有效。

产品组成：

产品使用：

1. siRNA的制备：

a. 对于siRNA的制备，参考下表在冰浴中配制如下反应体系(以20和100μl体系为例)：

注1：为获得最好的底物酶切效果，实验过程中可参考酶活单位定义对酶用量进行适当调整，摸索最优反应体系。

注2：如果同时进行多个反应，可以把上表中除RNase III之外所有成分提前混合，分装到各反应管中，最后再加入RNase III。

b. 按上表设置好反应体系后，适当轻轻混匀反应体系，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。

c. 反应条件：37ºC孵育20分钟。 注：反应时间可以根据实际情况酌情适当调节。

d. 终止反应：加入反应终止液10X EDTA(终浓度为50mM EDTA)使RNase III失去活性。 注：不能进行热失活，热失活会降低siRNA的产率。

2. 其它用途可以参考适当的文献资料进行。

注意事项：

1.   RNase III不能进行热失活，否则会降低siRNA的产率；可通过加入终浓度为50mM的EDTA以终止反应。

2.   RNA极易降解，在整个操作过程中应尽可能避免环境中RNase的影响。

3.   RNase III使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

4.   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！