Pronase E 链霉蛋白酶E

产品简介：

链霉蛋白酶E（Pronase E），来源于灰色链霉菌的一组蛋白酶（Protease from Streptomyces griseus），至少包含细胞外丝氨酸蛋白酶在内的三种蛋白酶活性。通常情况，丝氨酸蛋白酶具广谱的底物特异性，通过分子上一个天冬氨酸，一个组氨酸，和一个丝氨酸组成的活性位点来调控。本酶选择性偏好水解谷氨酸或天冬氨酸羧基形成的肽键，常见的丝氨酸活性位点抑制剂可抑制其活性，如PMSF和DFP。链霉蛋白酶E（Pronase E），还至少包含三种酪蛋白水解活性和一种氨基肽酶活性，这三种酪蛋白水解酶分别命名为灰色链霉菌来源蛋白酶A（Streptomyces griseus Protease A），蛋白酶B（Streptomyces griseus Protease B）和胰酶（Streptomyces griseus Trypsin）。

因此，本制品可用于蛋白的大量或者完全降解，还可用来研究蛋白酶抑制剂，以及热失活动力学。本制品常用于核酸分离步骤，在添加0.2% SDS和10 mM EDTA的体系内孵育0.5-3h即可达到目的。因其比已知的碱性蛋白酶在更高pH环境下，甚至0.2N NaOH溶液中，活性更强，因此非常适合不溶性蛋白的酶解实验，以及蛋白结构分析。另，还可与胶原酶和胰酶联合使用，以消化组织。也可作用纯化糖蛋白生产糖肽。

产品特性：

1）稳定性：pH 5.0-9.0范围内高度稳定，pH 8.8酶活性最强；

2）兼容性：与许多DNA/RNA分离缓冲体系兼容；

3）特异性：广谱底物特异性；由多种非特异性内/外切蛋白酶组成的混合物，可降解蛋白到单个氨基酸。

4）CAS NO：9036-06-0

5）质量控制：约含25%醋酸钙；

6）酶活性：≥3.5 units/mg solid

7）溶解性：在37℃，pH7.5的条件下，溶解于含0.05M醋酸钙的0.01M醋酸钠溶液，溶解体系添加钙离子可防止自发水解。含0.01-0.1M钙离子的稀释酶溶液，中性pH条件于2-8℃能稳定保存24h以上。

8）单位定义：在37℃，pH7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白产生的颜色变化等量于1µM酪氨酸（181µg）时需要的酶量，定义为1个活性单位。（颜色变化通过福林-酚试剂检测）

9）失活方法：80 °C以上加热15-20min使其完全失活。

保存条件: 

粉末-20℃保存，有效期3年；溶于溶剂，-80℃保存，有效期2年。

产品使用：

【注意】：本品应用非常广泛，具体的使用方法和工作浓度请根据实验经验或参考文献来调整。

1、储存液制备：溶解于去离子水，配制成5-20mg/ml的储存液，若用于DNA或RNA分离步骤，建议将溶液56℃加热处理15min，之后37℃孵育1h，此步骤能促使酶发生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后将储存液分成单次用量，-20℃冻存，通常情况1年稳定。

2、DNA分离：直接加入DNA制备体系（含有0.5-1% SDS以打破DNA-蛋白相互作用），典型工作浓度范围250-500µg蛋白/ml，于37℃孵育1-4h。【注意：建议工作浓度范围在250-2000µg/ml，依照具体情况而定】。

3、蛋白水解：溶解约0.2µM蛋白到0.2ml 50mM碳酸氢铵缓冲液，pH 8.0（或磷酸盐缓冲液，pH 7.0），之后按照1%（w/w）加入Pronase E，于37℃孵育24h。根据情况，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h。

注意事项：

1.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！