组织消化液（RUO）

Tissue Digestive Mix-I 

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【预期用途】 

 用于从组织上消化原代干细胞，做后续细胞体外增殖培养。 

 【检验原理】 

 以特定酶自组织块分离出原代间充质干细胞是常见的细胞培养技术。组织消化液利用数种重组表达的消化酶制备而成，无动物源成分。组织消化液针对组织的细胞外基质而设计, 不含胰酶，不会伤害细胞。可以有效地消化细胞外基质，进而从组织块 (脐带、 脂肪、胎盘) 分离出大量的原代间充质干细胞，作为后续细胞增殖使用。 

 【主要组成成分】 

 由 DMEM -LG 基础培养基、胶原脢、分散酶、脱氧核糖核酸酶组成。 

 【适用范围】 

 收获组织 (脐带、脂肪、胎盘)的原代间充质干细胞, 做后续细胞体外增殖培养。 

 【储存条件及有效期】 

 应贮存在-20℃~-10℃，有效期为1年。开封后存放 4℃，注意避光，1周内使用。不建议反复冻融。干冰运输。 

 【生产日期与失效日期】 

 详见产品标签。 

 【使用方法】 

 以脐带组织为例 

 1. 将脐带用DPBS漂洗干净，剪成1-2 cm大小， 剔除血管。 

 2. 将组织块剪成3-5 mm³，移入50 ml离心管， 再加入适量的分离液。 

* 一条长度10公分的脐带建议加入10 ml的分离液；或者组织块 : 分离液（vol）= 1:1。 

** 视情况而定，可自行在分离液中添加1%青链双抗。 

 3. 把 50 ml离心管横放在37℃细胞培养箱，过夜反应（16小时）。 

* 若总反应体积较大，也可持续旋转混合。 

 4. 加入和分离液等体积的 0.05%EDTA 终止反应 后，1500 xg离心5分钟，去除上清。 

* 溶液比较浓稠，小心不要影响下层的细胞; 建议留下5ml左右的溶液。 

** 没有EDTA, 可使用无钙镁DPBS取代。 

 5. 以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后， 300 xg离心5分钟，去除上清。 

 6. 再次以和分离液等体积的无钙镁 DPBS 重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。 

 7. 用适量的培养基重悬细胞后，即可按常规细胞培养方法接种P0代细胞培养。 

* 消化后的原代细胞，建议培养时接种密度提高到 10,000/cm² 以上；传代后即可按常规的接种密度培养 。 

以皮下脂肪组织块为例 

 1. 以 DPBS 将新鲜的皮下脂肪组织块漂洗干净，剔除明显的血管或血块。 

 2. 将组织块剪成3-5 mm³，移入50 ml离心管，再加入适量的分离液。 

* 1 克组织块可加入约5 ml分离液。 

** 视情况而定，可自行在分离液中添加 1%青链双抗。 

 3. 把 50 ml离心管横放在37℃细胞培养箱，反应4 小时 (用户也可自行调整反应时间)。 

* 若总反应体积较大，也可使用持续旋转混合。 

 4. 加入和分离液等体积的0.05%EDTA 终止反应后，300 xg离心5分钟，去除上清。 

* 没有EDTA, 也可使用无钙镁DPBS取代。 

 5. 以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。 

 6. 再次以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。 

 7. 用适量的培养基重悬细胞，再以100目的筛网过滤细胞液后，即可按常规细胞培养方法接种细胞培养。 

* 消化后的原代细胞，建议培养时接种密度提高到 10,000/cm²以上；传代后即可按常规的接种密度培养。 

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 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗