新型钙离子荧光探针Calbryte520, AM

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（NBS2009-1g）一起使用，以提高探针的水溶性。

产品简介：

钙离子检测在生命科学研究中具有关键作用。基于荧光探针与钙离子结合的光谱响应特性，研究人员可通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光谱和荧光酶标仪等技术精确监测细胞内游离钙离子浓度的动态变化。自1989年Fluo-3问世以来，后续开发的Fluo-4、Fluo-8和Cal-520系列探针虽提升了信背比，但Fluo-4仍存在显著缺陷：与Fluo-3类似，几乎所有基于Fluo-4的胞内钙检测都必须使用丙磺舒（probenecid）来防止探针外泄，而该抑制剂已被证实会产生复杂的细胞效应，严重影响检测结果。

Calbryte™ 520通过革命性突破解决了这一技术难题——其显著提升的信噪比和优化的胞内滞留特性（无需丙磺舒），使其成为目前最可靠的钙检测工具。该探针与Fluo-4具有完全一致的激发/发射波长，可直接兼容现有Fluo-4检测系统的所有参数设置，为研究人员提供了更精准、更便捷的实验方案。

产品优势：

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.多色兼容性：绿色荧光，适用于多通道成像

3.细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载

产品特性：

1）分子量：1090.90

2）溶剂：DMSO

3）解离常数（Kd，nM）：1200

4）Ex/Em：493/515

保存条件: 

-20℃避光保存

产品使用：

一、储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

Calbryte520, AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的Calbryte520, AM储备液。请注意，体积仅用于制备储备溶液。有关适当的实验/生理缓冲液，请参阅样品实验方案。

注意：Calbryte520, AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

二、工作溶液配制 

Calbryte520, AM 工作溶液

实验当天，将Calbryte520, AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic F-127，配制2-20 µM的Calbryte520, AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意1： 非离子型表面活性剂Pluronic F-127可增强Calbryte520, AM的水溶性。

注意2： 若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（货号：NBS2007）（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。我司提供多种丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（NBS2008-154MG），能降低有机溶剂的使用。

三、实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1. 将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2. 次日向细胞板中加入1X Calbryte520, AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3. 将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4. 移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5. 加入刺激剂后，立即使用配备FITC滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 490/525 nm，截止波长515 nm检测荧光信号

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。