Hoechst 33258 细胞核荧光探针

Hoechst 33258 Nuclear Fluorescent Probe
 

温馨提示：可查阅我司细胞核（Cell Nuclear）荧光探针产品专题了解更多信息。

产品简介：

Hoechst 33258，又称 bisBenzimide H 33258、HOE 33258（双苯并咪唑 H 33258），是可用于荧光显微镜与流式细胞仪检测 DNA 的蓝色荧光探针。本品可对活细胞或固定细胞进行染色，适用于流式细胞术开展细胞周期分析以及 DNA 浓缩状态监测。相较于同系列衍生物（如 Hoechst 33342），Hoechst 33258 的细胞膜穿透能力偏弱，但可通过建立荧光发射强度 - DNA 含量标准曲线，实现 DNA 含量的定量检测。游离状态下最大激发波长 346 nm，最大发射波长 460 nm；与双链 DNA 结合后，最大激发波长 352 nm，最大发射波长 461 nm，有效检测激发波段 350–365 nm、发射波段 460–490 nm。

Hoechst 33258 属于细胞膜通透性蓝色荧光染料，细胞毒性较低，水溶性良好，溶解度可达 10 mg/mL。该染料为 A/T 偏好型 DNA 小沟结合剂，特异性结合 DNA 富含 A-T 碱基的小沟区域，结合 DNA 后荧光信号显著增强；其荧光强度会随体系 pH 升高而上升。

Hoechst 33258 染色广泛应用于细胞凋亡检测（荧光显微镜或流式细胞仪采集信号）、常规细胞核染色与 DNA 染色；该染料作用可引起细胞 DNA 结构改变，诱发 G2/M 期阻滞，作为 DNA 特异性探针，常用于 DNA 含量测定、细胞周期分析等实验。

本品为粉末剂型，可根据实验需求自行配制至目标工作浓度。用于细胞核染色，推荐工作浓度为0.5-10 μg/mL；用于DNA 结合研究，推荐工作浓度为1-50 μM。如需即用型染色液，可选购即用型Hoechst 33258 染色液（货号NBS8035）。

化学信息: 

1)     CAS NO.：23491-45-4

2)     英文同义名：4-[5-(4-Methyl-1-piperazinyl)[2,5'-bi-1H-benzimidazol]-2'-yl] phenol trihydrochloride; bisBenzimide H 33258 trihydrochloride; HOE 33258; BBIH; BXI-72; NSC334072

3)     中文同义名：双苯并咪唑 H 33258 三盐酸盐；赫斯特荧光染料 33258；烟酸己可碱三盐酸盐；甲嗪双苯咪酚三盐酸盐

4)     分子式：C₂₅H₂₄N₆O · 3HCl

5)     分子量：533.88

6)     纯度：≥95%

7)     外观：黄色至深黄色粉末

8)     溶解性：溶于水，溶解度可达 10 mg/mL

9)     Ex/Em：346/460 nm（游离染料）；352/461 nm（与 DNA 结合后）

10)  结构式：

保存条件: 

-20℃避光保存（三年有效）

产品使用：

1.     储备液配制：

采用双蒸水进行溶解，溶解度可达 10 mg/mL，可按需配制适宜浓度的储存液（例如 5 mg/mL）；配制完成后避光、-20 ℃分装保存，避免反复冻融，有效期 6个月。

注：本品不可用磷酸盐缓冲液溶解，否则会产生沉淀。

2.     工作液配制：

临用前，取适量 Hoechst 33258 储备液，以双蒸水或 PBS 稀释至目标工作浓度（0.5–10 μg/mL）。

注：请根据实际情况调整 Hoechst 工作液浓度，且现用现配。

3.     固定细胞 / 组织染色：

固定后的细胞或组织样品，经洗涤充分去除固定剂后再染色。Hoechst 33258 一般放在多重染色流程的最后一步；若无其他染色需求，可直接进行本染料染色。

1)     贴壁细胞、组织切片：加入足量 Hoechst 33258 染色液，完全覆盖样品。

悬浮细胞：加入不低于样品体积 3 倍的染色液，充分混匀，室温孵育 3–5 min。

2)     吸去染色液，采用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2–3 次，每次 3–5 min。

3)     可直接镜检，或封片后置于荧光显微镜观察。激发 / 发射波长：Ex/Em = 352/461 nm。

4.     活细胞 / 活组织染色：

1)     向细胞培养体系中加入 Hoechst 33258 染色液，添加体积约为培养基体积的 1/10，确保样品被完全覆盖。参考用量：6 孔板每孔约 1 mL；96 孔板每孔约 100 μL。

2)     37 ℃孵育 10–20 min。

3)     PBS 或适宜缓冲液洗涤细胞 2 次。

4)     可直接镜检，或封片后置于荧光显微镜观察。激发 / 发射波长：Ex/Em = 352/461 nm。

注意事项：

1.     Hoechst 33258 具有一定刺激性，操作时请做好防护。

2.     荧光染料易发生光淬灭，建议染色后当日完成检测。可使用抗荧光淬灭封片剂（货号NBS0032），延缓荧光淬灭。

3.     为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！