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通用裂解液

Universal Lysis Buffer

产品介绍 

Universal Lysis Buffer（通用裂解液）是一种使用非常广泛的，在非变性条件下裂解组织或细胞的裂解液，样品包括动物、植物的细胞或组织， 以及细菌样品。提取的蛋白样品可用于PAGE，Western Blot，免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP）IP，免疫共沉淀（Co-IP）和pull-down等实验。

1 裂解方式 

常见的裂解方法有两大类，物理法与化学法。物理方法，例如超声法、均质法、研磨法、冻融法等。化学方法，例如有机溶剂法、酸碱裂菌法、溶菌 酶消化法。化学方法的优势在于不受体积的限制，可以处理微升级别样品。其中，溶菌酶法对原核细胞和大多数真核细胞有较好的裂解效果。 酸碱裂菌法速度快、效率高，但条件剧烈不利于维持蛋白的天然构象，该法在核酸提取中应用最为广泛。通用裂解液针对多种样本，采用温和 的表面活性剂，并添加蛋白保护剂进行裂解，保持原有的分子结构和蛋白间相互作用。

2 蛋白保护剂 

通用裂解液中含有甘油和多种蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，可以在裂解过程中保护蛋白的稳定性。磷酸酶抑制剂中包含了酸性、碱性以及 酪氨酸/丝氨酸/苏氨酸磷酸酶抑制剂。而蛋白酶抑制剂包含了金属蛋白酶、氨肽酶以及丝氨酸/天冬氨酸/半胱氨酸抑制剂，代替了有毒的PMSF。

3 主要用途 

1）小量样本的快速裂解，后续可用于小量诱导蛋白的可溶性鉴定、pull-down、IP/Co-IP等实验。 

2）中量样本的快速裂解，后续可用于蛋白纯化、性质表征。

使用方法

1 提取细胞蛋白

贴壁或悬浮细胞 

1) 贴壁细胞：去除单层细胞的培养基后，用1×PBS漂洗2-3次（去除血清），然后加入胰酶消化（一般1~5min，有些细胞可能需要更长的时 间），使用血清或者含有血清的培养基终止消化，加入1×PBS重悬后，将细胞放至离心管中； 悬浮细胞：将细胞悬液以2000rpm，4℃离心5min，弃上清，收集细胞，用1×PBS轻柔漂洗一次。 

2) 4000rpm，4℃离心10min收集细胞，去除上清，收集沉淀；然后通过涡旋或者手指轻弹管底，分散底部的细胞。

3) 按照每5×106个CHO或293细胞加入1ml的通用裂解液重悬。 

4) 用移液枪吹打数下使裂解液和细胞充分接触；冰浴或4℃处理15min，使细胞充分裂解。

原核细胞 

1) 取1ml（OD600在1.0-1.2之间）菌液4000rpm ，4℃离心10min，去除上清，用1×PBS重悬并清洗一遍。 

2) 再次4000rpm，4℃离心10min收集细胞，去除上清，收集沉淀；然后通过涡旋或者手指轻弹管底，分散底部的细菌。 

3) 加入200μl通用裂解液，轻轻涡旋以混匀，冰浴或4℃处理15min。

酵母细胞 

1) 使用贴壁酶、玻璃珠研磨等方式对酵母进行前处理（该步骤不可省略，可提高通用裂解液对酵母细胞的裂解效果）。 

2) 取 1ml酵母液4000rpm ，4℃离心10min，去除上清，用1×PBS重悬并清洗一遍。 

3) 4000rpm ，4℃离心 10min，去除上清，然后通过涡旋或者手指轻弹管底，分散底部的酵母。 

4) 加 入 200μl通用裂解液，轻轻涡旋以混匀，冰浴或4℃处理15min。

蛋白样品收集 

1) 样品充分裂解后，10000~14000×g离心3-5min，取上清。 

2) 进行后续的PAGE、WB、IP和Co-IP等实验。

2 提取组织蛋白（植物或动物） 

1) 将新鲜组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，洗净组织血迹，用滤纸吸干组织表面液体，然后将组织切成细小的碎片（该步骤可使 用液氮或玻璃珠研磨替代，裂解效果更佳）。 

2) 准备多个EP管，称重并做好标记，将组织小块放入EP管中，称重，按照每20mg组织加入200μl裂解液的比例加入裂解液；如果裂解不 完全，可适当增加裂解液使用量（不超过两倍用量）；如果需要较高浓度的蛋白样品，可适当减少裂解液使用量（不低于1/2用量）。 

3) 冰浴或4℃处理15min。 

4) 10000~14000×g 离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、WB、IP和Co-IP等实验。

注意事项 

1) 建议对裂解液进行分装，尽量避免反复冻融；请在冰上或者4℃裂解样品。 

2) 裂解得到的蛋白样品含有干扰Bradford法检测的物质，建议使用BCA法蛋白浓度检测试剂盒测定蛋白浓度。 

3) 若裂解样品粘稠，在无核酸处理方案的情况下，可稀释裂解样品。 

4) 裂解液中含有甘油与表面活性剂，不建议用透析袋的方法进行浓缩，可通过层析柱富集或降低裂解比例。 

5) 为了您的安全和健康，实验过程中请穿实验服并戴一次性手套进行操作。 

6) 本产品仅限科研使用。

保存条件

1) 本产品为单组分，短期内（60天）可放置于2-8℃保存，长期保存可冻存于-20℃一年，避免反复冻融。

2) 产品运输温度为2-8℃；可以在收到产品后，分装冻存，复溶后需要混合均匀再使用。

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